您现在的位置是:首页 > 综合问答 > 正文
抗原抗体杂交现象(2024年05月29日抗原抗体杂交)
发布时间:2024-05-29 19:10:13张亨新来源:
今天火狐为大家解答以上的问题。抗原抗体杂交现象,2024年05月29日抗原抗体杂交相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧!
1、抗原抗体杂交就是Western杂交,原理 Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方法。
2、其原理是:生物中含有一定量的目的蛋白。
3、先从生物细胞中提取总蛋白或目的蛋白,将蛋白质样品溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中,经SDS-PAGE电泳将蛋白质按分子量大小分离,再把分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上,接着将膜浸泡在高浓度的蛋白质溶液中温育,以封闭其非特异性位点。
4、然后加入特异抗性体(一抗),膜上的目的蛋白(抗原)与一抗结合后,再加入能与一抗专一性结合的带标记的二抗(通常一抗用兔来源的抗体时,二抗常用羊抗兔免疫球蛋白抗体),最后通过二抗上带标记化合物(一般为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)的特异性反应进行检测。
5、根据检测结果,从而可得知被检生物(植物)细胞内目的蛋白的表达与否、表达量及分子量等情况。
6、 Western 杂交技术是一种蛋白质的固定和分析技术,是将已用聚丙烯酰胺凝胶或其它凝胶或电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维滤膜上,固定在滤膜上的蛋白质成分仍保留抗原活性及与其它大分子特异性结合的能力,所以能与特异性抗体或核酸结合,其程序Southern Blot相似,故称为Western Blot,第一抗体与膜上特异抗原结合后,再用标记的二抗(同位素或非同位素的酶)来检测,此方法可检测1ng抗原蛋白。
7、Western杂交方法灵敏度高,通常可从植物总蛋白中检测出50ng的特异性的目的蛋白。
8、编辑本段试剂配制 (1)转移电泳缓冲液:20mmol/L Tris HCL pH8.0 150mmol/L 甘氨酸 加14.5g Tris粉 67.08g甘氨酸于4L水中,加入1200mL 甲醇,加水至6L (2)丽春红S溶液:0.5%丽春红S 1%乙酸编辑本段操作步骤: (1)用已制备好的SDS-PAGE分离的蛋白凝胶。
9、 (2)用一张滤纸,剪成与胶同样大小,在转移电泳缓冲液中预湿,放在Scotch-Brit Pad上,在胶的阴性端放上滤纸,胶的表面用该缓冲液浸湿,排出所有气泡。
10、 (3)在胶的阳极面放置同样大小浸湿的硝酸纤维素膜,排出气泡,再在滤膜的阳极端放置一张滤纸,排出气泡,再放一个Scotch-Brit Pad。
11、 (4)将以上“三明治”样装置放入一个塑料支撑物中间,将支撑物放入电转移装置中,加入电转移缓冲液。
12、 (5)接通电源:使胶上的蛋白转移到硝酸纤维素膜上,电压为14V 4℃转移4小时或过夜。
13、 (6)将滤膜放入丽春红S溶液中5分钟,蛋白染色水中脱色2分钟,照像,用印度墨水将分子量标准染色,在水中完全脱色。
14、 (7)将滤膜放在塑料袋中,每3张加入5mL封闭缓冲液(1克速溶去脂奶粉溶于100ml PBS中),封闭特异性抗体结合位点,室温1h,摇动,倒出封闭缓冲液。
15、 (8)在封闭缓冲液中稀释第一抗体,加入后室温放置1小时,将滤膜转到塑料盒中,用200mL PBS洗四次,摇动。
16、 (9)在封闭缓冲液中稀释辣根过氧化物酶标记的二抗,重复步骤8。
17、 (10)将滤膜放在100mL新配制的DAB底物溶液中,大约2~3分钟就可显色,用水冲洗终止反应、照像。
18、 结果分析:分析阳性(显色)条带的分子量大小,而且根据信号(颜色)强弱分析蛋白表达量。
本文就为大家分享到这里,希望小伙伴们会喜欢。
标签:
猜你喜欢
- 抗原抗体杂交现象(2024年05月29日抗原抗体杂交)
- 企业注册号大全(2024年05月29日企业注册号查询)
- 大唐豪侠官网下载(2024年05月29日大唐豪侠8月26日重开)
- 教资国考和省考的时间(2024年05月29日教师资格证的国考和省考有什么区别)
- 魔兽世界2021插件(2024年05月29日魔兽世界插件放哪里)
- 2020年关于电动车的最新规定(2024年05月29日关于电动自行车的使用错误的是)
- 2024年05月29日犯罪现场之华灯初上吗(2024年05月29日犯罪现场之华灯初上)
- 黄梅戏女驸马选段歌词(2024年05月29日黄梅戏女驸马歌词)
- 2024年土地证到期了怎么办(2024年05月29日土地管理办法土地可以租用多少年)
- 钢木门质量好不好看哪里(2024年05月29日钢木门十大品牌排行榜)
- 金樽金樽清酒斗十千玉盘珍羞直万钱(2024年05月29日金樽清酒斗十千玉盘珍羞直万钱作用)
- 2024年5月4日(2024年05月29日modest)
- 2024年5月25日(2024年05月29日蛇年生人2019年运程)
- 霍雨浩和唐三谁更强(2024年05月29日霍雨浩和唐三谁厉害)
- cvt无极变速箱怎么样(2024年05月29日cvt无极变速是什么意思)
- excel 判断是否包含字符(2024年05月29日excel判断是否包含一些文字)
- 2024年5月29日大写如何写(2024年05月29日science是什么意思)
- 隧道施工方案及施工工艺(2024年05月29日隧道施工方法)
- 对于一些子宫内膜异位症相关的卵巢癌来说 时机就是一切
- 2024年5月29日黄历(2024年05月29日蝌蚪文)
最新文章
- 抗原抗体杂交现象(2024年05月29日抗原抗体杂交)
- 期权溢价率计算公式(2024年05月29日溢价期权是什么意思)
- 恒通股份接受多家机构调研,裕龙港务打开新成长空间
- 湖南白银:近期银价大幅上涨对公司今年业绩存在正相关的影响
- 贵州茅台“新帅”首秀!回应了这些
- 四川九洲:终止收购志良电子 股价大跌6.78%
- 联动科技获1家机构调研:公司QT-8400系列测试平台的推出符合公司在 大功率器件和第三代半导体测试应用领域的布局和规划,产品凝聚了公司在中大功率器件测试和应用领域多年的技术经验和优势(附调研问答)
- 细木工板优点缺点(2024年05月29日细木工板优缺点以及选购技巧)
- 毛刷规格型号尺寸(2024年05月29日毛刷规格尺寸)
- swissgear怎么样(2024年05月29日swissgear是什么牌子)
- 企业注册号大全(2024年05月29日企业注册号查询)
- 看护假是什么假(2024年05月29日看护假)
- 沧州明珠获13家机构调研:公司技术和设备人员有多年的双向拉伸产线的技术积累,有多条同步拉伸产线设计和制造经验,已成熟掌握了锂电池湿法隔膜工艺和干法隔膜工艺技术(附调研问答)
- 青岛银行获1家机构调研:我行先后成立青银金租、青银理财两家子公司,不断拓宽业务边界,在传统信贷业务的基础上,探索多元化发展模式(附调研问答)
- 长远锂科:公司固态电池方面与行业内主流电池企业均有紧密的技术合作
- 爱婴室:净利润近三年稳步提升 以全渠道+品牌力助推企业高质量发展
- 粤港澳机器人与人工智能大会举行 巨轮智能机器人项目获皇冠明珠奖
- 支付宝花呗开通不了?(2024年05月29日支付宝花呗开通不了解决办法)
- 抱抱总裁大人(2024年05月29日抱抱首席大恶魔)
- 大唐豪侠官网下载(2024年05月29日大唐豪侠8月26日重开)
- 2024年5月有31号吗(2024年05月29日纳秒)
- 连续4日净买入 工业富联获沪股通净买入7.65亿元
- 连续4日净买入 中际旭创获深股通净买入3.95亿元
- Opera与谷歌云合作 Aria接入Gemini大模型